貼壁生長的細胞,在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后,空間已基本上飽和,細胞生長、增殖受阻,為使其繼續(xù)擴增或生長,需要進行傳代(再培養(yǎng))處理。同時,傳代培養(yǎng)也可用于細胞種的保存。不僅如此,各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎的。
懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。一般使用胰蛋白酶,將貼壁細胞消化成成單個細胞,也可加入EDTA提高消化能力(EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+)。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。
實驗時,先用吸去細胞培養(yǎng)上清,用PBS清洗細胞,棄掉洗滌液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同,一般2-5ml消化液即可,以剛好鋪滿整個皿底為原則),觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要3-5分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的培養(yǎng)基中止消化。
800-1000rpm,離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養(yǎng)。
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