提到配制細(xì)胞培養(yǎng)基，你能想到啥？

營養(yǎng)成分和緩沖體系多數(shù)情況下都是必要的，但這抗生素，真的是必要的嗎？有了抗生素，細(xì)胞就無懼污染了嗎？

雖然知道一直添加不好，但抗生素能避免細(xì)菌污染，實際上還是會一直加的。

如果培養(yǎng)環(huán)境足夠潔凈，

我覺得可以不用抗生素！關(guān)于抗生素在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的意義，一直都有很矛盾，不用細(xì)胞容易污染，一直用對細(xì)胞狀態(tài)也會有影響，到底該怎么辦？今天我們就來一探究竟。

抗生素對細(xì)胞的影響

很多同學(xué)養(yǎng)細(xì)胞的手藝，都是從師兄師姐那里「傳承」來的，由于沒有辦法做到絕對的無菌，所以從經(jīng)驗角度出發(fā)，前輩們都會告訴剛開始養(yǎng)細(xì)胞的同學(xué)，可以在配制培養(yǎng)基的時候，加入1%左右的雙抗，防止細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染（有些時候甚至出現(xiàn)離開抗生素，細(xì)胞沒過幾天立馬就被污染的情況）。

這就造成一些小伙伴在培養(yǎng)基中「預(yù)防性添加抗生素」，其實圖的就是個心安，抱著「有了抗生素就不怕污染」的心態(tài)。但事實上，抗生素并不是「免死金牌」，真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟?，甚至濫用還會適得其反。

這抗生素對細(xì)胞有什么影響呢？

早在十幾年前，就有很多報導(dǎo)指出β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素，對真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用[1]。并且這種抑制增殖作用在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯[2-3]。2017年，加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章，呼吁在細(xì)胞培養(yǎng)過程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現(xiàn)抗生素（雙抗：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。其中有209個基因的表達(dá)發(fā)生了改變，特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。超過9,500個基因調(diào)控元件發(fā)生了變化，并且很多調(diào)節(jié)元件位于參與細(xì)胞分化，核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數(shù)量在龐大的細(xì)胞基因庫中不值一提，但這絕對不是一個應(yīng)該被忽略的事件。

雖然抗生素對真核細(xì)胞生長的影響機(jī)制至今尚未明確，但是為了細(xì)胞更好的生長，實驗結(jié)果更加準(zhǔn)確，實驗數(shù)據(jù)更加穩(wěn)定，在實驗過程中盡量不要隨意使用。

參考文獻(xiàn)：

[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.

[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.

[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.

[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.

如何有效避免污染？

抗生素對細(xì)胞有一定傷害，但是不加抗生素又要怎樣避免實驗出現(xiàn)污染的狀況呢？

1、實驗環(huán)境（包括培養(yǎng)箱內(nèi)部、冰箱、超凈臺）要進(jìn)行定期*的消毒，用消毒液（75%乙醇溶液、新潔爾滅等）擦拭地面墻面桌面等地方，不留衛(wèi)生死角；紫外線照射30分鐘以上。

2、定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺臺、桌面等地方。

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3、培養(yǎng)箱、水浴鍋的水槽要定期清潔，用支原體預(yù)防試劑處理。

4、細(xì)胞房實驗要用專用的實驗服：進(jìn)入細(xì)胞房正式實驗前須換上專用防護(hù)服、專用鞋或鞋套。

5、實驗廢料不在細(xì)胞房堆積，及時清理。

6、遵照細(xì)胞實驗操作方法，實驗過程中嚴(yán)格無菌操作。

另外，選擇一款合格的實驗試劑也很重要。就拿血清來說，合格的血清產(chǎn)品，一定要有明確的檢測報告，指出微生物檢測情況。

以Ausbian血清為例：各項指標(biāo)均符合要求。

Ausbian血清的*優(yōu)勢

1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細(xì)胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細(xì)胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會有多批次平行供應(yīng)，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控，每個批次附有詳細(xì)完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查（細(xì)菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等）、促細(xì)胞生長能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面，提供更多免費延伸性技術(shù)幫助。）

6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

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