許多時(shí)候，都需要無菌環(huán)境，無菌培養(yǎng)。例如細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，為了保證無菌，有時(shí)需要加入抗生素。但長期加抗生素對細(xì)胞也不利。一些特殊實(shí)驗(yàn)也需要不含抗生素。有沒有一種方法，可提早知道細(xì)胞是否有細(xì)菌污染呢？

有些客戶采用了德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的細(xì)菌檢測試劑盒（英文名：Onar® Bacteria Detection Kit，貨號(hào)），它是PCR方法，可快速檢測生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。該試劑盒引物針對細(xì)菌16s rRNA的高保守區(qū),，可檢測超過45種細(xì)菌屬。

該試劑盒中的主要試劑均為凍干粉，性能穩(wěn)定。它包含有：

凍干預(yù)混液：含引物/核苷酸/內(nèi)控對照DNA /聚合酶

反應(yīng)緩沖液

凍干的陽性對照DNA

PCR級(jí)水

樣本可以是細(xì)胞上清，樣本不用提DNA，但需要熱滅活（95 °C 5分鐘）。

樣本需不含抗生素。如含抗生素，則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。

細(xì)菌陽性擴(kuò)增片段450 bp左右，內(nèi)控對照擴(kuò)增片段約140bp。

該試劑盒的檢測限為2.4×10的3次方細(xì)菌 /ml。

為避免假陽性，建議使用帶濾芯吸頭。

擴(kuò)增后跑膠觀察條帶，即可判斷結(jié)果。示意圖如下：

圖. 內(nèi)控對照顯示PCR反應(yīng)正常，樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶，提示存在細(xì)菌污染。

該產(chǎn)品有2篇引用文獻(xiàn)，如下：

1. Linow M., (2012). Mastermix 16S – Ultra Sensitive Detection of Microbial DNA. Research in Molecular Diagnostics, No. 2/12.

2. Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.

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